Perito Criminal – Farmácia - 2018

A técnica de western blotting (Towbin et al. 1979; Burnette 1981; Towbin and Gordon 1984) também pode ser denominada protei n immunoblot e consiste na detecção de proteínas específicas em amostras de lisados celulares ou amostras de tecidos. Com base nessa técnica, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.

I- Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências dessas proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados.

II- Diversos métodos espectroscópicos são utilizados para quantificar proteínas em uma solução. O ensaio de Bradford é o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como a rapidez, a não exigência de aquecimento e a alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. O método de Bradford se baseia na mudança de cor do corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida (cor azulada) para cor avermelhada na presença de proteínas. As interações hidrofóbicas e iônicas estabilizam o complexo proteína-corante.

III- Para separar as proteínas de uma amostra homogênea, a técnica mais utilizada é a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-poliacrilamida, que será uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel é preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. As proteínas podem possuir cargas positivas ou negativas, dependendo das cargas dos aminoácidos que as compõem.

IV- Para visualizar uma proteína de interesse, é utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epítopo da proteína, formando um complexo anticorpoantígeno. Esse anticorpo é denominado anticorpo primário, que pode ser policlonal (reconhece mais de um epítopo) ou monoclonal (reconhece apenas um epítopo da proteína de interesse) e é geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho.

Com base na interação fármaco-receptor sabemos que a ocupação de um receptor por uma molécula de um fármaco pode ou não resultar na ativação desse receptor. Com base nessas interações, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.

I- O Antagonismo competitivo reversível é aquele, no qual, na presença do antagonista, a curva do log da concentração x efeito do agonista é deslocada para esquerda, sem alteração na inclinação ou no efeito máximo, sendo a extensão do deslocamento uma medida da razão de dose.

II- O Antagonista competitivo de não equilíbrio, ocorre quando o antagonista se dissocia dos receptores, tendo como resultado a não alteração da ocupação do antagonista quando o agonista é aplicado.

III- O aumento da concentração do agonista supera o efeito do antagonista reversível, de modo que a resposta não se altera enquanto o efeito de um antagonista não competitivo é insuperável, e a ocupação total pelo agonista não pode ser atingida.

IV- O antagonismo competitivo irreversível ocorre com fármacos que possuem grupos reativos que formam ligações covalentes com o receptor.

V- Além do sítio de ligação ao agonista, no qual os antagonistas competitivos se ligam, as proteínas receptores possuem muitos outros sítios de ligação através dos quais fármacos podem influenciar a função do receptor de várias maneiras, aumentando ou diminuindo a afinidade dos agonistas pelo sítio de ligação do agonista ou modificando a eficácia.

“Embora estejamos acostumados a pensar que os receptores são ativados apenas quando uma molécula de um agonista se liga a eles, há exemplos nos quais pode ocorrer um nível apreciável de ativação, mesmo na ausência de ligantes. Esses exemplos incluem os receptores para benzoadiazepínicos, canabinoides, serotonina e alguns outros mediadores. Além disso, ocorrem mutações nos receptores que resultam em substancial ativação na ausência de qualquer ligante.’’ O gráfico a seguir representa o nível de ativação (%) de um determinado receptor biológico na presença de diferentes concentrações de um fármaco agonista, um agonista inverso, um agonista na presença de um antagonista e um agonista inverso na presença de antagonista. Dessa forma, com base no gráfico a seguir, julgue as alternativas e marque a CORRETA.

Sobre o etanol, marque a alternativa INCORRETA.

Nos anos 1970, a farmacologia entrou em uma nova fase, quando os receptores, que até então tinham sido entidades teóricas, começaram a emergir como realidades bioquímicas como consequência do desenvolvimento de técnicas de marcação. Existem 4 tipos de receptores: Tipo 1 (canais iônicos controlados por ligantes), Tipo 2 (receptores acoplados a proteínas G), Tipo 3 (receptores relacionados e ligados a quinases) e Tipo 4 (receptores nucleares). Com base nessa classificação, marque a alternativa que contém respectivamente exemplos de receptores do Tipo 1, 2, 3 e 4.

As proteínas G englobam uma família de proteínas residentes na membrana cuja função é reconhecer os GPCRs ativados e transmitir a mensagem para sistemas efetores que geram uma resposta celular. Com base nessas proteínas, assinale a alternativa INCORRETA.

O estudo da regulação do Ca2+ deu um passo muito grande no início da década de 1970 com o desenvolvimento das técnicas de fluorescência baseadas na fotoproteína sensível ao Ca2+ , a equorina, e de corantes como o Fura-2, que permitiram, pela primeira vez, que o [Ca2+]i livre fosse monitorado em células vivas, com um alto nível de resolução temporal e espacial. Sobre os canais de cálcio, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.

I- Os canais de cálcio operados por armazenamento são canais de muito baixa condutância, localizados na membrana plasmática que se abrem para permitir a entrada de cálcio, quando as reservas no retículo endoplasmático estão reduzidas, porém não são sensíveis ao [Ca2+]i citosólico.

II- Os canais de cálcio operados por voltagem são altamente seletivos para o Ca2+ , não conduzindo Na+ ou K+ , os canais de Ca2+ estão sempre presentes em células excitáveis e segundo as pesquisas existem cerca de 5 tipos: L, T, N, P/Q e R.

III- O receptor de trifosfato de inositol (IP3R) é ativado pelo IP3. O IP3R é um canal iônico regulado por ligante. Esse é o principal mecanismo pelo qual a ativação dos receptores acoplados à proteína G leva a um aumento do [Ca2+]i.

IV- O receptor de rianodina localizado no retículo endoplasmático medeia a liberação de Ca2+ , evocada por Ca2+ no músculo, a cafeína em altas concentrações ativa esse receptor.

Julgue as afirmativas a seguir como verdadeira (V) ou falsa (F) e marque a alternativa CORRETA.

I- O etomidato é similar ao tiopental, porém metabolizado mais rapidamente e possui menor risco de causar depressão cardiovascular.

II- A cetamina é um poderoso analgésico, análago da fenciclidina e possui ação diferente dos outros anestésicos intravenosos, provavelmente, devido ao seu efeito sobre os receptores de glutamato tipo NMDA.

III- O propofol é um potente anestésico intravenoso com ação e distribuição lenta, possuindo risco de causar bradicardia.

IV- O tiopental é um barbitúrico com alta lipossolubilidade, possui uma ação imediata devido à rápida transferência, através da barreira hematoencefálica, possuindo curta duração, em razão da redistribuição, principalmente para o sistema muscular.

A era dos benzodiazepínicos (BZD) foi instaurada após o lançamento comercial do primeiro elemento da série, o clordiazepóxido, em 1960 (sintetizado em 1955). Outro protótipo dessa classe, de 3 a 10 vezes mais potente que o primeiro, foi o diazepam, lançado em 1963. Desde então, foram sintetizados mais de 3000 compostos BZD, sendo 35 disponíveis para uso médico. Estudos clínicos iniciais comprovaram sua eficácia nos transtornos ansiosos, além de ação hipnótica, amnéstica, anticonvulsivante e relaxante muscular. Contudo, ao menos parte de sua popularidade no meio médico se deveu à margem de segurança oferecida por essa classe de fármacos, substituindo, assim, os barbitúricos como tranquilizantes e hipnóticos. Assim, os BZD logo se tornaram os fármacos mais prescritos no mundo, nas décadas de 60 e 70, tendo alcançado uma estabilidade e até redução no número de novas prescrições após medidas de controle adotadas em vários países, a partir da metade da década de 70. Assinale a alternativa que demonstra o mecanismo de ação dos Benzodiazepínicos.

A espectrometria de absorção atômica é utilizada para a determinação de diversos elementos da tabela periódica e consiste, basicamente, de quatro técnicas: absorção atômica com chama, geração de hidretos, geração de vapor frio e forno de grafite. Para a determinação da concentração do analito por absorção atômica, a radiação de uma fonte de comprimento de onda específico, de acordo com o elemento analisado, incide sob o vapor atômico contendo átomos livres desse elemento no estado fundamental. A atenuação da radiação é proporcional à concentração do analito, segundo a lei de Lambert-Beer. Com base nisso, analise as afirmativas a seguir como verdadeira (V) ou falsa (F) e marque a alternativa CORRETA.

I- Espectrometria de absorção atômica com chama consiste numa câmara de pré-mistura na qual o combustível e o oxidante são misturados, e do queimador que recebe a mistura combustível-oxidante. A solução é introduzida através de um nebulizador pneumático, no qual é gerado um fino aerossol que é conduzido até a chama. A quantidade de energia que pode ser fornecida pela chama para a dissociação e atomização da amostra é proporcional à temperatura.

II- A espectrometria de absorção atômica com geração de hidretos é uma técnica utilizada para a determinação de elementos formadores de hidretos voláteis, mais comumente para As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Pb e Te. O processo é constituído de três etapas principais: geração, transporte e atomização dos hidretos. O sistema pode ser construído em batelada ou em fluxo. A geração dos hidretos consiste na reação do analito, normalmente em meio ácido, com um redutor (NaBH4). O transporte dos hidretos do frasco de reação até a cela de quartzo é feito através de um gás inerte de arraste tal como argônio ou nitrogênio.

III- A espectrometria de absorção atômica com geração de vapor frio é utilizada para a determinação de mercúrio. O equipamento e os reagentes são os mesmos utilizados no sistema de geração de hidretos, porém a cela de quartzo precisa ser aquecida, pois o mercúrio é reduzido a mercúrio metálico, que é volátil a altas temperaturas.

IV- A espectrometria de absorção atômica com forno de grafite é uma técnica abrangente que possui elevada sensibilidade. O forno consiste de um tubo de grafite de 3 a 5 cm de comprimento e de 3 a 8 mm de diâmetro revestido com grafite pirolítico. A quantidade de amostra injetada no forno varia de 5 µL a 50 µL e é geralmente introduzida por um sistema automatizado. O forno é aquecido eletricamente através da passagem de corrente elétrica de modo longitudinal ou transversal. Fluxos de gases inertes como argônio são mantidos externamente e internamente para evitar a combustão do forno. Além disso, o fluxo interno expulsa o ar atmosférico do forno e também os vapores gerados durante as etapas de secagem e pirólise